Akai QX-3700 User Manual download pdf (Page 8)

formacyjne, można natomiast założyć, że takie for

my są stabilizowane w polimerze. Możliwość po

wstawania różnego typu polimerów Sup35 pokazano

także w systemie in vitro [23].

Poparcie dla rewolucyjnej hipotezy prionów dro-

żdżowych stanowi odkrycie, że kluczową rolę w

dziedziczeniu [PSI] pełni białko opiekuńcze

Hspl04. Okazało się, że nadprodukcja białka

HSpl04 w komórce powoduje inaktywację fenotypu

[PSI] [26]. Jedyną znaną funkcją komórkową białka

Hspl04 jest reaktywowanie struktur białkowych

zmienionych wskutek stresu [27], a więc wpływ tego

białka na dziedziczenie [PSI] stanowi dodatkowy ar

gument przemawiający za tym, że przekazywanie in

formacji genetycznej może opierać się na transmisji

konformacji białka.

Paradoksalnie, również Hspl04 jest niezbędne do

indukcji prionu, gdyż mutanty [PSI] nie powstają w

szczepie z nieaktywnym genem HSP104 w chromo

somie [26]. A więc stabilna konformacja prionu wy

maga określonego poziomu białka Hspl04; gdy tego

białka jest w komórce zbyt mało, lub też za dużo -

nie obserwuje się fenotypu [PSI]. W badaniach in vi

tro z udziałem oczyszczonych białek w roztworze

wykazano, że Hspl04 oddziałuje bezpośrednio z

Sup35 i przyspiesza jego przemianę w prion [28].

Według hipotezy sformułowanej przez L i n d q u -

i s t rola Hspl04 polegałaby na nadaniu Sup35 takiej

konformacji przejściowej, która umożliwiłaby jego

oddziaływanie z „zarodkiem” prionu. W nieobecno

ści Hspl04 taka konformacja nie byłaby możliwa,

zaś w jego nadmiarze - skupiska Sup35 za bardzo

rozproszone, aby utworzyć agregaty [26] (Ryc. 5).

Kushnirov i Ter-Avanesyan proponują

inne wytłumaczenie podkreślając aktywność

Hspl04 we fragmentacji agregatów prionu [21].

Ryc. 5. Rola H spl04 w dziedziczeniu [PSI], Model S. L i n d q u i s t .

Według tych autorów Hspl04 nie jest niezbędne do

powstawania prionu, lecz jego rola polega na umożli

wieniu przekazywania prionów do komórek potom-

nych, co zachodzi pod warunkiem rozbicia włókien

agregatów na mniejsze cząsteczki. Taka fragmenta-

cja generuje nowe końce włókien i stymuluje dalszą

polimeryzację. W nieobecności Hspl04 prion po

wstaje, ale, jako zbyt duży agregat, nie jest przekazy

wany do komórki potomnej. W nadmiarze Hspl04

agregaty ulegają rozbiciu, co obserwuje się jako in

aktywację fenotypu [PSI],

Istnieją tylko pewne przesłanki na temat roli

białek opiekuńczych w kontroli struktury prionu PrP

u ssaków. Wiadomo, że do powstania prionu PrPSc

konieczne jest białko Prpc, ale bynajmniej nie jest

powiedziane, że jest to element wystarczający.

Według Kushnirova i Ter -Avanesyana

różny stopień fragmentacji agregatów PrP decyduje

o różnych własnościach prionów PrP stanowiących o

syndromach różnych chorób u człowieka [2 1 ],

W eksperymentach in vitro stwierdzono specy

ficzne oddziaływanie Hspl04 z białkami Sup35, Prp

a także z P-amyloidem [28]. Stwierdzono także, że

Hsp 104 ułatwia konwersję PrP do prionu. Wynik ten

potwierdza sugestie udziału chaperonów w powsta

waniu prionów i amyloidów u człowieka. Być może

sterowanie ilością białek opiekuńczych mogłoby sta

nowić zasadę mechanizmu terapeutycznego w przy

padku chorób określanych jako pasażowalne amylo-

idozy mózgowe.

VI. Badania biochemiczne i obserwacje mi

kroskopowe prionów

Kolejnym poparciem teorii prionów u niższych

eukariontów są wyniki badań biochemicznych i mi

kroskopowych. Podobnie jak prion ssaczy PrPSc wy

kazuje zwiększoną oporność na dzałanie proteazy w

porównaniu z białkiem komórkowym PrPc , białko

Sup35 ze szczepu [PSI] jest oporniejsze na trawienie

proteaząniz białko Sup35 ze szczepu konrolnego [5,

29]. Niezależnie stwierdzono, że białko Ure2 wyka

zuje zwiększoną oporność na działanie proteazy w

szczepach [URE] [10]. Analogicznie różnice obser

wowano dla produktu genu het-s u Podosporci, który

był oporniejszy na działanie proteaz w ekstraktach

szczepu [het-s] w porównaniu do [het-s*] [3].

W mutantach [PSI] i [URE] obserwowano odpo

wiednio frakcje białek Sup35 i Ure2 w postaci wyso-

kocząsteczkowych agregatów. Stwierdzono także, że

lizat z komórek [PSI] indukuje agregację Sup35 w

szczepach kontrolnych [18, 29, 30],

Konwersję białka Sup35 do formy prionu można

obserwować bezpośrednio w komórkach pod mikro

skopem. W tym celu skonstruowano fuzję fragmen

tów DNA kodujących N-terminalną domenę Sup35 i

112

POSTĘPY BIOCHEMII 46(2), 2000

http://rcin.org.pl

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 ... 94 95

Comments to this Manuals

No comments

Akai QX-3700 User Manual Page 8

Comments to this Manuals