Akai QX-3700 User Manual download pdf (Page 37)

II. Ogólna charakterystyka kinazy białkowej

CKI

Kinaza białkowa CKI należy do kinaz seryno-

wo/treoninowych, niezależnych od cyklicznych nu

kleotydów. Obecność CKI wykazano we wszystkich

zbadanych do tej pory organizmach eukariotycz

nych. Enzym ten występuje w komórce w formie

wolnej w cytoplazmie, w formie związanej z błona

mi, a także w jądrze i mitochondriach [5, 6 ]. Kinaza

białkowa CKI izolowana jest zawsze w formie ak

tywnego monomeru o masie cząsteczkowej w grani

cach 25kDa-65kDa. CKI fosforyluje in vitro białka

cytoszkieletu takie jak miozyna, ankyrina, troponi-

na, spektryna; polimerazy RNA I i II; czynniki ini

cjacyjne translacji: eIF4B, eIF4E, eIF5; syntetazy

aminoacylo-tRNA; duży antygen T wirusa SV40; re

ceptor insuliny; podjednostkę regulatorową fosfata

zy I (inhibitor 2); syntazę glikogenu, białko p53,

białka rybosomowe i inne [6-9]. Tylko w nielicznych

przypadkach fosforylacja danego białka została po

twierdzona in vivo i wydaje się być skorelowana z

jego funkcją. Wykazano na przykład, że fosforylacja

fosfatazy I powoduje hamowanie aktywności enzy

mu [10]. Zdolność białka CREM do wiązania się z

DNA jest znacznie większa po fosforylacyjnej mo

dyfikacji przez CKI. Aktywność syntazy glikogenu

jest silnie hamowana po fosforylacji przez kinazę za

leżną od cAMP, a następnie przez CKI [11]. Nato

miast białko p53 po fosforylacyjnej modyfikacji

przez CKI jest aktywowane. Zależność pomiędzy

fosforylacjąbiałka przez CKI a jego funkcjąwykaza-

no również w przypadku dużego antygenu T wirusa

SV40. Fosforylacja tego białka powoduje zahamo

wanie inicjacji replikacji wirusowego DNA [12, 13].

III. Kinaza białkowa CKI — „gracz

zespołowy”

Badania biochemiczne nad kinazą CKI, jak wcze

śniej wspomniano, trwają już od kilkudziesięciu lat.

Niejednokrotnie doniesienia z poszczególnych labo

ratoriów odnośnie właściwości tego enzymu bywały

różne. Dotyczyło to między innymi masy cząstecz

kowej CKI, lokalizacji subkomórkowej czy też nie

których właściwości biochemicznych enzymu. Do

piero na początku lat dziewięćdziesiątych w literatu

rze zaczęły pojawiać się wyniki badań genetycz

nych, wskazujące na obecność wielu form CKI kodo

wanych przez niezależne geny.

U ssaków wykazano obecność 7 genów ko

dujących różne formy CKI. W drożdżach

pączkujących Saccharom yces cerevisiae istnieją 4

geny, natomiast u drożdży rozszczepkowych Schizo-

saccharomyces pom be wykazano obecność 5 genów

kodujących różne formy tego enzymu. Poszczególne

formy CKI, zarówno u ssaków jak i u drożdży mają

różną wielkość, różną lokalizację subkomórkową

oraz pełnią różne funkcje w komórce. Przedstawione

poniżej tabele są próbą uporządkowania obecnego

stanu wiedzy odnośnie występowania kinazy białko

wej CKI u ssaków (Tabela 1) oraz drożdży (Tabe

la 2). Można przypuszczać, że badania najbliższych

lat przyniosą odpowiedzi na wiele pytań odnośnie

występowania i funkcji CKI w komórkach eukario

tycznych.

Mnogość form kinazy białkowej CKI potęguje

fakt, że w wyniku alternatywnego składania genów

mogą powstawać dodatkowe warianty CKI. Tak jest

w przypadku CKIa, której liczba wariantów sięga

ośmiu i CKIy3, występującej w dwóch alternatyw

nych formach [8 ]. Zwiększa to do 16 ilość form kina

zy białkowej CKI u ssaków.

Wszystkie poznane formy kinazy CKI posiadają

koniec aminowy składający się z 9-76 aminokwa

sów, ściśle zachowany obszar katalityczny zawie

rający około 300 aminokwasów oraz koniec karbo

ksylowy, którego długość jest różna w poszczegól

nych enzymach i waha się w granicach od 24 do 200

aminokwasów. Niektóre formy CKI u drożdży

(Ycklp, Yck2p, Yck3p, Ckil, Cki2) w końcu kar

boksylowym posiadają miejsce ulegające prenylacji.

Modyfikacja ta umożliwia przyłączenie tych enzy

mów do błony komórkowej. W przeciwieństwie do

drożdży, żadna z CKI znaleziona u ssaków nie ulega

prenylacji [8 , 32],

Wszystkie formy kinazy białkowej CKI w swoich

domenach katalitycznych wykazują bardzo wysoki

stopień identyczności. Zawsze wynosi on powyżej

50% podczas gdy w stosunku do innych kinaz nie

przekracza 20%. Rycina 1 przedstawia filogenetycz

ne pokrewieństwo poszczególnych form kinazy

białkowej CKI.

Kinaza białkowa CKI z powodu występowania w

wielu formach określana jest w literaturze jako

„gracz zespołowy”. Spotyka się również stwierdze

nie, że komórki eukariotyczne posiadają nadmiar ge

nów kodujących CKI. Istotnie, spośród mnogości

form CKI można wyróżnić enzymy mające tę samą

lokalizację subkomórkową oraz pełniące podobne

funkcje w komórce. Wykazano, że u S. cerevisiae

HRR25 i YCK3 tworzą niezbędną dla przeżywalności

komórki parę genów, których produkty białkowe zlo

kalizowane są w jądrze komórkowym i biorą udział

w procesach naprawy DNA. Delecja każdego z tych

genów powoduje jedynie zmiany fenotypowe, pod

POSTĘPY BIOCHEMII 46(2), 2000

141

http://rcin.org.pl

1 2 ... 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 ... 94 95

Comments to this Manuals

No comments

Akai QX-3700 User Manual Page 37

Comments to this Manuals