Akai QX-3700 User Manual download pdf (Page 31)

różnią ją od innych syntaz. NOS3 jest bogata w proli-

nę i zawiera sekwencje docelowe dla acylotransferaz

przeprowadzających mirystylację i palmitylację. Ta

syntaza jest zakotwiczona w błonie, podczas gdy po

zostałe syntazy znajdują się w cytoplazmie [8 , 19,

52, 85-87]. Syntazy endotelialna (NOS3) i neuronal-

na (NOS 1) sązależne od kompleksu Ca2+/kalmoduli-

na, natomiast syntaza indukowalna (NOS2) jest nie

zależna od Ca2+ i kalmoduliny [90-93]. Wszystkie

trzy syntazy są homodimerami zawierającymi: hem,

FAD, FMN i BH4 [7, 8 ]. N-końcowy fragment

cząsteczki enzymu zajmuje domena oksygenazowa

(oxy), a fragment C-końcowy stanowi domena re-

duktazowa (red) [90], Struktury domen i wielkości

poszczególnych izoform podano w tabeli 2. Domena

oksygenazowa ma zdolność przyłączania L-argini

ny, zawiera także miejsca wiązania hemu i BH4 oraz

ma możliwość tworzenia kompleksu żelazo-CO

[94], Domena reduktazowa posiada zdolność reduk

cji cytochromu c, zależnej od NADPH. Zawiera

miejsca wiązania NADPH, FAD i FMN. Pomiędzy

domenami zlokalizowane jest miejsce wiązania

kompleksu Ca2+/kalmodulina [90, 95, 96]. Kompleks

Ca2+/kalmodulina ułatwia przeniesienie elektronów

Tabela 2.

Produkty białkowe genów syntaz tlenku azotu

z domeny reduktazowej na domenę oksygenazową

(w obecności Ca2+/CaM aktywność domeny redukta

zowej jest dziesięciokrotnie większa niż aktywność

tej domeny przy braku Ca2+/CaM) [90, 97]. Wyko

rzystując system ekspresyjny baculovirus można

otrzymać oddzielnie obie domeny, które po rekon-

stytucji dają pełną aktywność enzymatyczną NOS3

[90,94], Domena oksygenazowa zawiera ok. 0,3

mola BH4 na mol domeny, podczas gdy domena re

duktazowa zawiera po 0,7 mola FAD i FMN na mol

tej domeny [90], W układach rekonstytuowanych

maksymalną aktywność NOS3 otrzymuje się po

zmieszaniu obu domen w stosunku molowym

red:oxy (2:1), a rekonstytuowana NOS2 wykazuje

maksymalną aktywność gdy jedna domena redukta

zowa przypada na kilka domen oksygenazowych

[90]. Aktywność NOS3 jest około dziesięć razy

mniejsza niż aktywność NOSI [90], Na aktywność

NOS wpływają: czynniki regulujące stabilność

białka (TGF-fł destabilizuje białko i mRNA), chela-

tory kationów (EDTA), fosforylacja reszt seryno-

wych, dostępność argininy i jej analogów (przy nie

doborze argininy i nadmiarze NADPH zamiast NO

powstaje ponadtlenek lub wodorotlenek), dostęp

ność tlenu i BH4 oraz obecność NO (NO hamuje

NOS) [4, 52, 69, 90].

V. Uwagi końcowe

Znane są: struktura, lokalizacja, regulacja ekspre

sji genów, alternatywny splicing transkryptów oraz

struktura i właściwości produktów białkowych

wszystkich trzech izoform syntaz tlenku azotu (Ryc.

2).

Nie wiadomo jednak, czy obserwowane różnice w

sekwencji cDNA dotyczące pojedynczych nukleoty

dów [57] dowodzą istnienia innych alleli genów Nos,

czy też są one wynikiem np. mutacji punktowych lub

redagowania mRNA. Wydaje się też interesujące wy

jaśnienie czy allele ludzkiego genu Nos3 są polimor-

ficzne, gdyż polimorfizm genetyczny mógłby stano

wić czynnik ryzyka niektórych chorób, lub też

mógłby usprawiedliwiać mniejszą podatność róż

nych osobników na szkodliwe działanie czynników

środowiska [19]. Polimorfizm odkryto w intronach 4

i 13 genu Nos3 [19, 54, 98, 99]. Nie wyjaśniono jed

nak czy wpływa on na splicing i czy ma związek z

chorobami układu krążenia. Ze względu na ważną

Izoforma NOS 1

NOS 2

NOS 3

Masa cząsteczkowa (kD)

161,000 131,000

136,000

Liczba aminokwasów

1434 1153

1203

Domeny

Reduktazowa

Oksygenazowa

C-końcowa , zawiera miejsca wiązania : FMN , FAD i NADPH

N-końcowa , zawiera miejsca wiązania : L-argininy , hemu i BH4

Regulacja aktywności

Ca2+/CaM niezależna od Ca2+/CaM

Ca2+/CaM

Występowanie w komórkach

cytoplazma

związana z błonami

Główne miejsce działania

układ nerwowy

układ odpornościowy układ krążenia

POSTĘPY BIOCHEMII 46(2), 2000

135

http://rcin.org.pl

1 2 ... 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 ... 94 95

Comments to this Manuals

No comments

Akai QX-3700 User Manual Page 31

Comments to this Manuals