Akai QX-3700 User Manual download pdf (Page 75)

badania wskazywały, iż domeny te są zlokalizowane

w cytoplazmie komórek [3]. Ostatnio jednak wyka

zano, że część domeny C-końcowej białka NHE3 jest

obecna na zewnątrz komórki [22]. Już wstępne do

świadczenia pokazywały, że domena C-końcowa an-

typorterów Na+/H+ odpowiada za regulację ich ak

tywności transportowej poprzez oddziaływanie z do

meną transbłonową. Usunięcie cytoplazmatycznej

części białka powoduje zanik ich wrażliwości na sty

mulację hormonalną oraz zmienia wrażliwość białek

NHE na wewnątrzkomórkowe stężenie jonów H+

[20]. C-końcowe fragmenty białek NE1E zawierają

liczne miejsca potencjalnej fosforylacji oraz se

kwencje odpowiedzialne za oddziaływanie antypor-

terów z białkami regulującymi ich aktywność [23].

Domena C-końcowa białka NHE2 zawiera dwa re

giony (Pro-1 i Pro-2) szczególnie bogate w prolinę,

podobne do domen homologii 3 src (SH3 — ang. src-

homology-3 binding domains) [24]. Rejon Pro-1

wiąże in vitro domeny SH3 różnych białek, nato

miast Pro-2 oddziałuje raczej z domenami kinaz

białkowych. Następnie wykazano, że region Pro-1

jest niezbędny, aby antyporter NHE2 był zlokalizo

wany w błonie apikalnej komórek nabłonkowych. W

komórkach, w których zachodzi ekspresja białek

NHE2 niezawierających domeny Pro-1, antyportery

występują w błonie komórkowej po stronie bazolate-

ralnej oraz w cytoplazmie komórek [24].

cDNA izoform NHE z błony plazmatycznej za

wiera sekwencję kodującą, tzw. peptyd sygnałowy,

składający się z aminokwasów hydrofobowych i hy

drofitowych, zawierający miejsce potencjalnego tra

wienia przez peptydazę sygnałową (Ryc. 1) [25]. Nie

jest jeszcze jasne, czy peptyd sygnałowy jest usuwa

ny podczas procesu dojrzewania białek NHE, czy

może stanowi integralną część dojrzałego antyporte-

ra, zakotwiczającą białko w błonie plazmatycznej.

Z kolei, na N-końcu sekwencji białka NHE6 , przy

pomocy programu PSORT [26], znaleziono sekwen

cję kierującą to białko do wewnętrznej błony mito-

chondrialnej. Mitochondrialna lokalizacja NHE6 zo

stała również potwierdzona w komórkach transfeko-

wanych białkiem fuzyjnym składającym się z białka

NHE6 oraz fluoryzującego białka GFP (ang. green

fluorescent protein)

[19]. Znajdujące się wN-końco-

wej części antyporterów Na+/H+ transbłonowe helisy

M6 i M7 (Ryc. 1) stanowią rejon najbardziej konser

watywny poszczególnych izoform NHE (do 95%

identycznych aminokwasów), co sugeruje, że jest to

rejon bezpośrednio zaangażowany w transport jo-

nów. F a f o u r n o u x i wsp. [27] wykazali, że w

NHE1 zastąpienie glutaminianu 262 w domenie M7

przez izoleucynę (Glu262Ile) prowadzi do całkowi

tego zahamowania transportu jonów przez ten anty

porter (mierzono pobieranie jonów 22Na+) [27].

Antyportery Na+/H+ najprawdopodobniej wystę

pują w błonach plazmatycznych w postaci homodi-

merów [27, 28]. Dokładne miejsca oddziaływania

monomerów nie zostały jednak jeszcze zidentyfiko

wane. Wiadomo, że istotną, dla tego oddziaływania,

rolę gra rejon transbłonowy białek NHE oraz praw

dopodobnie powstające pomiędzy monomerami

wiązania dwusiarczkowe [28].

W sekwencji antyporterów Na+/H+ znaleziono kil

ka miejsc potencjalnej glikozylacji. Białko NHE1

zawiera aminokwasy zarówno N- (Asn75) jak i

O-glikozylowane [21, 24]. Z kolei NHE2 po

chodzące z tkanek królika ulega wyłącznie O-gliko-

zylacji [16], a NHE3 prawdopodobnie nie jest wcale

glikozylowane [29]. Usunięcie podjednostek węglo

wodanowych z białek NHE1 i NHE2 nie powodo

wało jednak widocznych zmian w szybkości trans

portu jonów ani przez błony pęcherzyków lipido

wych, ani w transfekowanych komórkach [16, 25,

30]. Również w części N-końcowej białka NHE6

znaleziono miejsce mogące ulec N-glikozylacji

(Asn369) [19].

mRNA izoformy NHE1 ulega ekspresji praktycz

nie we wszystkich tkankach (Tabela 1) i komórkach

Tabela 1

Lokalizacja tkankowa poszczególnych izoform antyporterów Na+/H+

Izoforma Lokalizacja tkankowa Bibliografia

NHE1

Wszystkie przebadane rodzaje ko

mórek i tkanek, błony bazolateral-

ne i apikalne

[3]

NHE2

Nabłonki kanalików nerkowych,

jelita i żołądka, błony bazolateral-

ne i apikalne

[14],[15],[31]

NHE3

Nabłonki jelita, nerek (kanaliki

proksymalne), i żołądka, błony

apikalne

[14], [29], [31]

NHE4

Żołądek, jelito >ncrki, mózg, ma

cica, mięśnie szkieletowe

[14]

NHE5

Mózg, śledziona, jądra

[32], [33]

NHE6

Mózg, mięśnie szkieletowe, serce

[19]

ssaczych. Prawdopodobnie białko to pełni funkcje w

tak podstawowych procesach jak utrzymywanie i re

gulacja wewnątrzkomórkowego pH oraz regulacja

objętości komórki [3], Wykazano, że promotor genu

NHE1 jest aktywowany in vitro pod wpływem wielu

czynników mitogennych, a więc że aktywność NHE 1

może być regulowana w procesach wzrostu i różni

POSTĘPY BIOCHEMII 46(2), 2000

179

http://rcin.org.pl

1 2 ... 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 ... 94 95

Comments to this Manuals

No comments

Akai QX-3700 User Manual Page 75

Comments to this Manuals