Akai QX-3700 User Manual download pdf (Page 46)

Powyższe wnioski dotyczące roli podjednostki (3 w

regulacji aktywności enzymu, zdają się być potwier

dzone przez wyniki badań z użyciem peptydowych

substratów CKII. Wykazano, że poziom fosforylacji

peptydu jest wypadkową pozytywnego i negatywne

go działania podjednostek p na podjednostki a. W

mutantach substytucyjnych, u których sekwencja

aminokwasów w N-końcu podjednostki P kinazy

CKII została zmieniona zaobserwowano hyperakty-

wację podjednostki a przez podjednostkę P, jak rów

nież brak hamującego wpływu podjednostki p na fos-

forylację kalmoduliny przez holoenzym CKII [27].

Aktywność kinazy CKII jest, jak wcześniej wspo

mniano, stymulowana przez poliaminy, szczególnie

sperminę oraz zasadowe polipeptydy, np. polilizynę.

Stymulacja aktywności CKII przez poliaminy jest

najbardziej widoczna w odniesieniu do takich sub

stratów jak kazeina czy czynnik transkrypcyjny

MyoD i ma miejsce jedynie w obecności podjednost

ki P przy niskim stężeniu jonów Mg++.

Nieznany jest jeszcze mechanizm regulacji ak

tywności CKII przez polikationy, niemniej jednak w

literaturze pojawiają się próby jego wyjaśnienia. Na

rycinie 2 przedstawiony jest model stymulacji ak

tywności kinazy CKII przez sperminę zaproponowa

ny przez L ero y i wsp. [29,30].

katalityczne

Ryc. 2. Model stymulacji aktywności kinazy CKII przez sperminę wg

Leroy i wsp. [30]- zmodyfikowane, objaśnienia w tekście.

Struktura holoenzymu CKII jest stabilizowana

przez oddziaływania elektrostatyczne pomiędzy do

datnio naładowanymi resztami w centrum katalitycz

nym podjednostki a, a ujemnymi ładunkami podjed-

nostki p, znajdującymi się w części N-końcowej po-

lipeptydu. Taka „zamknięta” konformacja holoenzy

mu, stabilna przy ImM stężeniu jonów Mg++, ograni

cza dostęp substratów do centrum katalitycznego en

zymu. Spermina, jak twierdzi Leroy przyłącza się

do miejsca wiążącego poliaminy znajdującego się

jak wcześniej wspomniano w N-końcu podjednostki

regulatorowej. Powoduje to odsłonięcie centrum ka

talitycznego enzymu. CKII przybiera konformację

„otwartą” i centrum katalityczne staje się bardziej

dostępne dla substratu.

W ostatnich latach wzrosła liczba poznanych

białek zdolnych do interakcji z podjednostką p kina

zy CKII. Przypuszcza się, że niektóre z tych białek

dzięki obecności w strukturze pierwszorzędowej

szeregu aminokwasów o charakterze zasadowym

mogą „naśladować” działanie polilizyny. Ma to

miejsce w przypadku fosforylacji białka Mdm2

przez CKII. Białko Mdm2 jest inhibitorem białka

p53. Fosforylacja Mdm2, podobnie jak fosforylacja

kalmoduliny jest hamowana przez podjednostkę re

gulatorową CKII. Wykazano, że fosforylacja białka

Mdm2 przez kinazę CKII jest stymulowana przez ko

niec C białka p53, naśladujący działanie polilizyny

[31].

U drożdży S. pom be dysrupcja genu kodującego

podjednostkę P CKII powoduje znaczny spadek ak

tywności CKII. W tym przypadku aktywność pod

jednostki katalitycznej CKII jest bardzo niska i pod-

jednostka P jest niezbędna do uzyskania dostatecznej

dla prawidłowego funkcjonowania komórek aktyw

ności enzymu. Warto tu zaznaczyć, że u S. pom be se

kwencja kwaśnych aminokwasów w N-końcu pod

jednostki p, odpowiedzialnych za hamowanie ak

tywności podjednostki katalitycznej nie jest tak do

brze zachowana. Sugeruje to, że u tego gatunku dro

żdży funkcją podjednostek P jest jedynie stymulacja

aktywności podjednostek katalitycznych [cyt za 6 ],

Z literatury wiadomo, że u niektórych organi

zmów takich jak Zea mays czy Dictyostelium istnieją

monomeryczne formy CKII, odpowiadające podjed-

nostce a [32, 33].

Dotychczas brak jest przekonywujących dowo

dów dotyczących regulacji aktywności CKII przez

fosforylację. Podjednostką p jest fosforylowana

przez podjednostkę katalityczną CKII w N-końcu

(Ser2 i / lub Ser3) [34], Wykazano, że autofosforyla-

cja CKII powoduje niewielki spadek aktywności en

zymu [35] jak również, że aktywność CKII in vitro

jest większa w obecności fosfataz, które prawdopo

dobnie utrzymują enzym w formie zdefosforylowa-

nej [36]. Z drugiej strony na przełomie lat osiemdzie

siątych i dziewięćdziesiątych pojawiały się prace su

centrum

150

POSTĘPY BIOCHEMII 46(2), 2000

http://rcin.org.pl

1 2 ... 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 ... 94 95

Comments to this Manuals

No comments

Akai QX-3700 User Manual Page 46

Comments to this Manuals